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方法介绍

液相色谱技术是一种功能强大的分离技术，具有高速、高效和高灵敏度的特点。它利用待测物质在色谱固定相和流动相之间保留性质的差异实现样品的分离。在色谱分离过程中，样品在流动相的携带下，在固定相与流动相之间反复吸附与解吸，最终按照保留能力由弱到强的顺序依次从色谱柱上洗脱分离。在色谱柱出口连接适当的检测器，就可以得到横轴为保留时间、纵轴为检测器响应值的色谱图。保留时间是样品从进入色谱柱到离开色谱柱所需要的时间，代表色谱柱对样品的保留能力，这是色谱技术对未知物质进行定性分析的依据；色谱检测器检测到的信号强度与化合物含量相关，这是色谱技术进行定量分析的依据。高效液相色谱法要求样品能够溶解在流动相中，流动相可选择含有改性剂的水溶液，或者甲醇、乙腈、四氢呋喃等有机溶剂，以适应不同样品的溶解性。为适应极性差异较大的复杂混合物的分离，可以使用水与有机溶剂的混合溶液进行梯度洗脱。液相色谱固定相的种类繁多，通常以键合硅胶为基础，在其表面修饰 C18、C8 或氰基等修饰基团，实现对中等极性和弱极性物质的保留和分离，键合硅胶通常被装填到内径 2.1- 4.6 mm，长度 50-250 mm 的不锈钢色谱柱中。色谱检测器也有多种选择，包括紫外检测器、荧光检测器、蒸发光散射检测器等。质谱是重要的液相色谱检测器，高效液相色谱与质谱配合使用就是所谓的液相色谱-质谱（液质）联用技术（LC-MS）。

离子色谱是高效液相色谱的一种，又称高效离子色谱（HPIC），其分离原理是离子交换树脂上固定的阴/阳离子基团可以与样品和流动相中电荷相反的溶质离子之间发生可逆交换。不同的待分析离子与离子交换树脂上交换剂的亲和力不同，因此在离子交换柱上保留时间不同，由此实现不同离子的分离。高端离子色谱仪配有淋洗液发生器，可以通过稀释淋洗液储罐中的高浓度储备液，在线自动生成所需浓度的淋洗液（也就是流动相，通常是一定浓度的KOH或者甲磺酸溶液），离子色谱通常配有电导和安培检测器。适用于亲水性阴、阳离子、氨基酸及糖类物质的分离。

实验流程

用户提供植物组织、动物组织、细胞、血液或体液等样品，加入蒸馏水超声或煮沸提取其中的离子或糖类物质；或加入提取液（80%-100%甲醇或乙腈）后，均质匀浆、超声或振荡提取其中的糖类和氨基酸，然后使用离子色谱进行分析。

送样要求

为确保实验结果的准确性，植物组织建议提供 100 mg~1 g，动物组织建议提供 30~200 mg，细胞建议提供 5×10⁶~1×10⁷个，微生物建议提供1×10⁷~1×10⁸个，体液（血清、血浆、脑脊液、淋巴液、尿液、唾液、透析液等）样品建议取样 100~200 μL。上述样品需准确称重或量取体积。

实验结果

使用外标法和离子色谱仪自带的色谱图定量数据分析软件对样品中的离子和糖类物质的含量进行定量分析。质谱实验室会将实验结果以电子邮件形式发送到用户的注册邮箱中，实验原始数据保存在质谱实验室服务器上，用户可以按需拷贝。